MILE米乐推出的新型探针法荧光定量PCR检测试剂盒，基于先进的荧光定量PCR原理，具备诸多优越特点：

产品特点

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 经过优化的引物和其他组分，具有高灵敏度。
3. 提供阳性对照，便于有效区分假阴性样品。
4. 特异性强，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，能有效避免与其他生物样本DNA的交叉反应。
5. 该试剂盒支持定性与定量检测，定量检测的线性范围至少可达5个数量级。
6. 本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 仅供科研使用。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

利用自选的方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，稀释操作须在独立区域进行，以避免污染样品或本试剂盒其他成分。具体步骤如下：
1. 标记6个离心管，编号为7、6、5、4、3、2。
2. 使用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照（由MILE米乐提供），充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
4. 重复相关步骤直至得到6个稀释度的标准曲线样品，若不需标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

针对待检样品数量N，准备N+2个qPCR管，向各PCR管中分别加入规定成分（请见详细说明书，欢迎向MILE米乐索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中添加2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽中，按照规定的扩增程序进行实验（请见详细说明书，如有疑问可联系MILE米乐）。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，再根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。
2. 若未制作标准曲线，判定结果的标准如下：阳性对照Ct值<30，具有显著的指数增长，并呈现典型的S型曲线；阴性对照Ct值38或无Ct值，无显著的指数增长和平台期。样本检测结果：Ct值<35，表明样本中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，表明未检测出，结果为阴性；若Ct值在35-38范围，需再次检测。

运输与保存

本产品需低温运输，保存温度为-20℃，有效期为一年。阳性对照必须单独放置，避免与其他试剂接触污染。