MILE米乐的SNU-1033细胞培养说明书提供了详细的操作指南，以确保您的细胞培养工作顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称：SNU-1033
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次建议1:2传代，2天后更换培养基。
备注：请使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。在对比效果不佳的情况下，建议直接选购MILE米乐的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

为获得最佳的细胞状态，请在细胞收到后及时补充完全培养液并封好瓶口。收到细胞后，先用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，再进行后续处理。观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议进行40x、100x、200x镜下观察），前三天的照片将作为重要的售后依据，不提供照片则默认接受的状态良好。（在传代后，建议一瓶使用原罐的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在更换培养基后松开瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

1. 如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，于37℃、5% CO2孵箱中培养；
2. 如果细胞密度超70%，即可进行传代，具体步骤为：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，如果细胞大部分变圆后脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，轻微摇晃并观察，待细胞开始回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化。轻轻吹打以使细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1mlMILE米乐的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护手套），快速将其置于37℃水浴中解冻，直到冻存管内无结晶，随后用75%的酒精消毒冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，由于某些细胞贴壁不牢，可能会发生脱落现象，这是正常的。如脱落数量较多，可以将培养液收集至离心管中，在1000rpm离心5分钟以收集沉淀。随后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止消化，再次离心处理，最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1) 如细胞出现问题，可重发的情况包括：运输过程中的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；细胞污染问题需在收到48小时内提供真实实验结果；常温发货的细胞静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内若大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片）；携带污染的细胞在特定条件下重发；细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法检验细胞活力。
2) 不予以重发的情况包括：客户造成的细胞污染、操作不当导致的细胞状态不良、非推荐培养体系导致的细胞问题，未提供必要照片的细胞状态问题等。