MILE米乐的细胞培养条件包括气相环境为95%空气和5%二氧化碳，适宜的培养温度为37℃。在细胞传代过程中，建议第一次采用1:2的传代比例。每两天更换培养基，确保细胞处于最佳状态。

在操作细胞之前，请仔细检查培养瓶上标注的细胞名称是否与您的订购一致，并确认无破损或漏液。如果未发现异常情况，建议在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍率的照片（建议40x、100x和200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如果未提供照片，则默认细胞状态良好。

MILE米乐的贴壁细胞传代步骤：首先，去除培养上清，并用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。然后，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，细胞大部分变圆并脱落后，迅速轻敲培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。接着，轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液后补加1-2ml完全培养基重悬。最后，将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充至每瓶5-8ml的完全培养基，再放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

对于悬浮细胞的传代，您可以采用半换液法或离心换液法。半换液法处理时将培养瓶竖放在培养箱中静置1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，并补充同等体积的完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可直接添加约500ul FBS。当传代时，可以直接补充5ml培养基，分为两个T25瓶进行培养。在经过3次这种传代后，可以进行离心传代以去除死细胞。

离心换液法则需要将细胞悬液收集到离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液重悬后，按1:2的比例分至新的T25瓶中，并添加新配制的完全培养基以保持细胞生长活力。

在细胞冻存时，当细胞生长覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS洗涤，然后添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液观察细胞，待细胞回缩后添加5ml完全培养液，轻轻吹打以使细胞脱落。最后，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，然后加入1ml的无血清冻存液混匀后装入冻存管，直接放入-80℃冰箱保存。

复苏细胞时，从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，擦拭冻存管外壁后，将细胞移至含5ml完全培养基的离心管，1000RPM离心5分钟。弃去上清后，重悬在5ml的完全培养基中，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养，第二天更换为新鲜的完全培养基。

需要注意的是，细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这是正常的。如出现较多脱落，可以将培养瓶内的培养液收集至离心管，进行离心以去除细胞杂质。若细胞出现问题，MILE米乐提供了重发服务的条款，如运输中导致的细胞丢失或污染，请在指定时间内提出申请并提供真实的实验结果，以及必要的照片。

对于客户造成的污染或错误操作导致的细胞问题，MILE米乐则不予以重发。请在收到细胞后及时检查并记录状态，以确保细胞培养的成功与稳定。